ELISA技術講座的五大重要點

    已經普遍到數大學實驗室的ELISA技術，有著重復性穩定及吸附性能好等特點。今天上海恒遠給大家帶來了相關實驗講座，ELISA試劑盒的五大重要點分析。
 

1. 靈敏度的要求
    根據我公司技術人員的分析：如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結構有關，所以結果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
 

2. 標本復查
    ELISA手工檢測過程復雜，影響因素較多，即使室內質控在控，也可能因孔間差異而造成結果的差異，因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法，可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。
3. 灰區的設置
    通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結果報告的依據。
    
4. 測試過程請注意：
   ① 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
   ② 試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
   ③ 實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
   ④ 酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
 

5. 常用的表示結果方法
   ① 定性測定
   ② 半定量測定，結果一般以滴度表示。
   ③ 定量測定，即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。