免疫組化中抗體選擇要求

1、一抗選擇

（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。

       由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)-彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對較小，檢測抗原靈敏度相對較低，而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

（2）種屬來源。

       家兔來源的抗體多是多克隆，而小鼠來源的抗體多是單克隆，但也有例外。根據(jù)此來源選擇相應(yīng)的二抗。

（3）種屬反應(yīng)性的選擇。

       這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差異，且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內(nèi)的抗原。

（4）能否做免疫組化。

       一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等，建議選擇注明的抗體（經(jīng)過文章證明）。

（5）檢測標(biāo)本類型。

      用于檢測石蠟切片還是冰凍切片，一般能做石蠟切片的抗體，都可用來檢測冰凍切片，但能做冰凍切片的抗體，不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

2、二抗選擇

（1）種屬來源。

       主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標(biāo)記物的選擇。

       有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物，一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記為二抗，與后面的SP結(jié)合反應(yīng)；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。（這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān)）。

（3）選擇IgM還是IgG。

      一抗是IgM，二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。