Hoechst染色方法實(shí)驗(yàn)步驟

1） 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。

2） 刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時(shí)間（可4℃過夜）。

3） 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

4） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

5） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

6） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液，切勿弄反。

7） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

2. 懸浮細(xì)胞

1） 離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細(xì)胞，固定10分鐘或更長時(shí)間（可4℃過夜）。

2） 離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)。

3） zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。

4） 稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。

5） 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。

6） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

7） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

8） H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

3. 組織切片

1） 常規(guī)包埋切片后，脫蠟，透明。

2） PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。可在六孔板中操作。

3） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。

4） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

5） 將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

6） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

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