鄰苯二醛組胺熒光法的操作程序及注意事項解析

鄰苯二醛組胺熒光法的操作程序及注意事項解析 
      1．操作程序
    （1）標本制備：新鮮組織冰凍切片或鋪片，風干后移至含P2O5的干燥器中繼續于燥4小時；固定的組織標本石蠟切片，脫蠟后風干；
    （2）鄰苯二醛處理：將40mg結晶鄰苯二醛加入已預熱至100℃的立式染色缸內，蓋好，約15分鐘后，取出染色缸，立即將干燥好的組織切片或鋪片移人染色缸內2—3分鐘；也可在室溫下將1％鄰苯二醛的乙基苯液直接滴加在切片或鋪片上反應4分鐘；
    （3）濕化：將標本移至濕盒內（但勿與水直接接觸）2～4分鐘；
    （4）80℃烘箱中作用5分鐘；
    （5）封片、熒光顯微鏡觀察分析同前；
    （6）結果：含組胺較高的細胞呈黃色熒光；組胺含量較少的細胞呈藍色熒光。

    2 ．原理  在一定溫度和濕度下，組織細胞內的組胺與鄰苯二醛（OPT）發生聚合反應。形成的聚合產物發出兩種熒光，一是組胺含量高時，呈黃色熒光，比較穩定，zui大激發波長為405nm；二是組胺含量低時。呈藍色熒光。不穩定，褪色較快。zui大激發波長為365nm。
    3．注意事項    
    （1）組胺含量低時，與鄰苯二醛縮合反應的熒光團不穩定，熒光易淬滅，需盡快觀察記錄；
    （2）鄰苯二醛與胰高血糖素等一些多肽的氨基末端組氨酸反應亦可形成較強熒光產物；
    （3）濕化處理較為關鍵，需嚴格控制；
    （4）對照實驗：省略鄰苯二醛液處理步驟，結果應為陰性。

組胺（HA）是一種血管活性物質和致痛物質，存在于外周肥大細胞、嗜堿性粒細胞以及  胃黏膜一些內分泌細胞的顆粒中，也存在于中樞神經系統的一些神經元突觸小泡內。

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