總抗氧化能力(T-AOC）試劑盒（DPPH法）

注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

研究意義：

測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測定原理：

DPPH·為穩定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中，在 515nm 處有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化劑時，會發生脫色反應，因此可用吸光度的變化并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質的抗氧化能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機、酶標儀、96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 120mL×1 瓶，使用前預冷。

試劑一：液體 45mL×1  瓶，避光保存。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA   抗凝）4℃，5000rpm  離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。

(2) 組織樣品

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

(3) 細胞樣品

按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

操作步驟：

1、酶標儀預熱 30min，調節波長至 515nm。

2、操作表（在 EP 管中反應）

注意：空白管只需測定一次，若A_測定小于 0.2，需用提取液稀釋后檢測。